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Western Blot mit Anti-M. marburgensis MtrH-Antikörpern:

Der vollständig gereinigte Mtr-Komplex mit Untereinheit MtrH (MtrA-H) sowie der

nach dem in dieser Arbeit neu etablierten Protokoll gereinigte Mtr-Komplex ohne

Untereinheit MtrH (MtrA-G) (siehe Abschnitte 3.5.1 und 3.5.2) wurden per SDS-Page

elektrophoretisch in ihre einzelne Untereinheiten aufgetrennt (siehe Abschnitt 3.4.2).

Die aufgetrennten Peptide wurden sodann auf eine PVDF-Membran übertragen und

die Untereinheit MtrH per direktem ELISA mit Anti-M. marburgensis MtrH-Antikörpern

(primäre Antikörper) und Anti-Kaninchen IgG F(ab’)

-Fragment-Alkalische

Phosphatase-Konjugat (sekundäre Antikörper) durch eine Farbreaktion

nachgewiesen (siehe Abschnitt 3.4.4).

Wie in Abbildung 4.6 zu sehen, ist beim vollständigen Mtr-Komplex mit MtrH

(MtrA-H) eine deutliche Bande bei ca. 33 kDa zu sehen, bei der es sich aufgrund der

Farbreaktion um MtrH handeln muss. Bei der Präparation des Mtr-Komplexes ohne

Untereinheit MtrH (MtrA-G) ist diese Bande nur sehr schwach ausgeprägt, d. h. eine

Abtrennung der Untereinheit MtrH ist bis auf einen äußerst geringen Restgehalt so

gut wie vollständig gelungen.

Abbildung 4.6: Western Blot mit Anti-M. marburgensis MtrH-Antikörpern nach Auftrennung

der Untereinheiten der gereinigten Mtr-Komplexe mit und ohne Untereinheit MtrH auf einem

12 %-igen SDS-Gel. Es wurden jeweils 2 µg gereinigtes Protein eingesetzt. Auf Bahn 1 wurde

der vollständige Mtr-Komplex mit Untereinheit MtrH (MtrA-H) aufgetragen. MtrH erscheint als

deutliche Bande bei ca. 33 kDa. Auf Bahn 2 wurde der Mtr-Komplex nach der Präparation

ohne Untereinheit MtrH aufgetrennt. Die 33 kDa-Bande von MtrH ist nur schwach sichtbar,

eine Abtrennung von MtrH während der Reinigung ist also weitgehend gelungen.

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